热门关键词:实验室废水处理设备、废液处理、废气处理、暂存系统、超纯水系统  
大发体育app下载 > 资讯动态 > 核酸检测实验室(PCR)如何消毒?
核酸检测实验室(PCR)如何消毒?
2020-07-30 [1128]

摘要:PCR实验,即临床基因扩增实验,是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段

 PCR实验,即临床基因扩增实验,是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。

而三级综合医院不具备核酸检测能力的少之又少,大多已经实现了PCR实验的基本要求,差别只在于开展项目略有不同,这项要求真正难以落实的主要问题是:二级医院/县医院建立PCR实验室不容易。

就新冠病毒核酸检测来说,RT-PCR是目前使用广泛和较准确的筛选和确认方法,大规模核酸检测,必然会引起相关机构单位着力建设规范的临床PCR实验室。但是,建立一个PCR实验室,其实就是在建设一个平台,考验的不仅仅是一个医疗机构的实验能力,也考验着整个医疗机构的整体能力。下面,笔者就为大家整理一下PCR实验室建设及日常管理方面的一些问题。

 

一、临床基因扩增检验实验室设计的核心问题是什么?

实验室的平面布局、空调通风 系统设计、气流控制等都是围绕同一个核心问题进行——“避免污染”,任何级别的医院在建设PCR实验室时,均需要提前考量各个因素,以保证标本的全环节质量及实验室的生物安全。

1、建设要求。PCR实验室的建设需要设置标准的“四区”:试剂准备区、标本制备区、PCR扩增检测区和扩增产物检测区。每个独立实验区设置有缓冲区,各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染,并降低扩增产物对人员和环境的污染。

2、人员要求。进入PCR实验室,需要经过从基础理论、实验原理、规范操作、质量保证到注意事项等规范的培训,并获取PCR上岗证。

3、检测风险。检测过程中,样本的开盖,核酸提取的震荡、离心都有可能产生气溶胶,有感染的风险。

4、防护要求。必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进行。

 

二、PCR实验的污染来源都有哪些?

1、样本间交叉污染:收集样本的容器被污染或样本密封不严导致外溢;不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖;移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌;不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散,相互交叉污染。

2、实验试剂污染:主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中,因为PCR试剂对温度十分敏感,需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于0℃,但这个过程也充满污染风险。

3、扩增产物污染:大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖,这是PCR反应中主要、常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大,远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。

4、克隆质粒污染:作为阳性质控品的克隆质粒外溢。

 

三、防止实验污染都有哪些措施?

对于低流行地区,PCR检测人员经过严格培训上岗后,核酸污染的风险相对较小,但在疫区超负荷工作时,就可能会遇到核酸污染的问题,可通过以下措施降低污染机会:

1、正确佩戴手套:手套未紧密贴合拇指、食指和中指,在进行开盖操作时容易发生交叉污染。

2、正确使用生物安全柜:简单、整洁、避免通风口堵塞;操作前后紫外线照射,消毒剂随手可及;废液缸里有1/3体积的含氯消毒液,并且及时清理废液缸,保证废物不超过废液缸体积的2/3。

3、核酸提取仪去污染:每天多批次检测时,在每一批次检测完以后必须用75%的乙醇和核酸去除剂对仪器进行去污染。

4、重视通风:不定期对房间进行通风,每次至少持续30min。

5、PCR扩增区去污染:PCR反应管必须盖紧,避免扩增后的核酸对环境的污染。

6、实验室随手可及的消毒剂。

 

四、PCR实验室的空气流向管理与环境消毒?

前面提到,PCR实验室可分为试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物检测区四个区域,这四个区域在物理空间上必须完全相互独立,各区域无论是在空间上还是在使用中,应当始终处于完全的分隔状态,不能有空气的直接相通。所以,临床基因扩增检验实验室的空气流向应按:试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物检测区,应时刻防止扩增产物顺空气气流进入扩增前区域。可按照上述顺序区域空气压力递减的方式进行,也可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行方式实现。

临床基因扩增检验实验室的环境清洁:《临床基因扩增实验室工作规范》中有对物表清洁、消毒的要求,不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。

(1)基本原则:由清洁区向污染区进行,洁具不可交叉。

(2)清洁消毒方向:准备区→标本制备区→扩增区→产物检测区。

(3)清洁消毒范围:工作区域的物体表面(含桌、椅),可使用含氯消毒剂擦拭消毒,空气和工作台面可使用紫外线照射消毒,也可使用空间消毒器进行全环节消毒。不可使用紫外线消毒器及化学消毒进行有人状态下的消毒。PCR室内的消毒应防止扬尘(减少人员走动)、杀灭DNA或RNA的基因片段。可选择悬挂紫外线灯管进行空气消毒,试验前照射30-60分钟,实验结束照射30-60分钟,必要时延长照射时间(可照射一夜)。

(4)终末消毒:当出现实验室污染时,应按要求马上撤出相关人员,在无人情况下可使用化学消毒剂进行终末消毒,如熏蒸法:过氧乙酸1g/ m³加热熏蒸(湿度70-90%),密闭24小时;气溶胶喷雾:3%过氧化氢:20mL/m³气溶胶喷雾;5%过氧乙酸2.5mL/m³气溶胶喷雾(湿度20-40%)。

 

五、日常清洁消毒应该如何做?

1、每日工作前后,对工作区域表面、地面进行清洁并消毒,使用含氯消毒液擦拭。清洁采用湿式、不扬尘的方式进行。

2、物品防尘存放。墙面定期清洁,有可见污染及时进行清洁消毒。配备移动紫外线消毒装置进行空气和物表的消毒。

3、生物安全柜的消毒:

(1)每天工作前:对生物安全柜的内表面进行消毒,包括工作台面和内壁使用消毒剂擦拭;

(2)工作结束:柜内物品全部消毒后移出。消毒剂擦拭台面四周、以及玻璃内侧灯部位;

(3)停用生物安全柜前:运行5min以净化内部空气;

(4)消毒剂应选择能够杀死生物安全柜里可能发生的任何微生物(70%乙醇、含氯消毒剂)。在使用漂白剂等腐蚀性消毒剂后,还应用无菌水再次进行擦拭;

(5)终末消毒:需要进行终末消毒的时机。

 

六、试验完成后,物品及环境如何处理?

(1)做好废液及固废处理;

(2)实验室空间消毒:在室温,50-60%湿度条件下,使用过氧乙酸熏蒸2g/m³,过夜;或使用20g/l气溶胶喷雾,用量8g/m³;

(3)物体表面消毒液:0.55%含氯消毒剂,现用现配,24小时内使用。 

XML 地图 | Sitemap 地图